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ELISA試劑盒試驗中常用到的封閉液配置方法
点击次数:17 发布时间:2019-10-26
       ELISA試劑盒的實驗中的封閉液小知識:
  ELISA試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點,蔗糖封閉的原理:
  1、elisa實驗中,蔗糖本身沒有封閉作用;
  2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
  3、加蔗糖的主要目的是保護ELISA板子吸附(包被)的蛋白,起到“保護劑”的作用。
  4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經過BSA封閉後加,當然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理;那一種更好需要你實驗後來驗證。但多數選擇前者。
  封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可),0.4%的明膠,但是實驗表明前者比較好,後者不容易洗幹淨未結合上的明膠。
  封閉劑的原理就是與酶聯板上未結合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上,結合抗體或抗原的時候就不會産生非特異結合了,不會影響實驗的准確度。
  ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置
  ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應爲基礎,ELISA試劑以及各種溶液如何配置?最近剛做了下ELISA實驗,把各種ELISA配置方法彙總如下:
  (1)ELISA实验包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):
  NaHCO3 1.59克
  NaHCO3 2.93克
  加蒸餾水至1000ml
  (2)ELISA实验洗涤缓冲液(PH7.4 PBS):0.15M
  KH2PO4 0.2克
  Na2HPO4·12H2O 2.9克
  NaCl 8.0克
  KCl 0.2克
  Tween-20 0.05%0.5ml
  加蒸餾水至1000ml
  (3)ELISA實驗稀釋液:
  牛血清白蛋白(BSA)0.1克
  加洗滌緩沖液至100ml
  或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。
  (4)ELISA实验终止液(2M H2SO4):
  蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
  (5)ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
  0.2M Na2HPO4(28.4克/L)25.7ml
  0.1M檸檬酸(19.2克/L)24.3ml
  加蒸餾水50ml。
  (6)ELISA實驗TMB(四甲基聯苯胺)使用液:
  TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml
  底物緩沖液(PH5.5)10ml
  0.75%H2O2 32μl
  (7)ELISA實驗ABTS使用液:
  ABTS 0.5mg
  底物緩沖液(PH5.5)1ml
  3%H2O2 2μl
  (8)ELISA實驗封閉液:
  牛血清白蛋白(BSA)5克
  加洗滌緩沖液至100ml。
  值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉,不適合長期保存。
  爲了保證ELISA實驗的准確性,實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要精確,將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔,嚴防交叉汙染。
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