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ELISA試劑盒的使用技巧分享
点击次数:229 发布时间:2019-06-10
        ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在上得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給同行帶來一些啓發,提高試驗質量。下面分析ELISA試驗操作中可能影響結果的原因,並給出相應的解決辦法。
  一、選擇試劑
  選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鍾。
  中洪博元實驗室常用ELISA試劑盒
  二、加樣
  可能原因:
  1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
  2)手工操作中,加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時);
  3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
  解決辦法:
  1)標本爲血清:zui好將血液先自然存放1-2小時後,再用3000rmp離心15分鍾;標本爲血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血後必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間後,3000rpm離心15分鍾;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
  2)加樣後及時放入孵箱。
  3)加酶試劑後用吸水紙在酶標板表面輕拭吸幹。
  4)如果采用AT或其他全自動加樣,zui好選擇FAME或其他後處理儀器加酶試劑。
  5)標本較多時,請分批操作。
  三、孵育
  可能原因:
  1)孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗徹底;
  2)孵育時間人爲延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗徹底。
  解決辦法:
  1)貼封片或加蓋;
  2)按說明步驟嚴格控制操作時間。
  四、洗板
  ELISA試劑盒可能原因:
  1)采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
  2)采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不徹底;洗板針堵塞,抽吸不完全;洗板不暢,導致洗板效果差。
  3)反應板過多造成洗板等待時間長。
  解決辦法:
  1)保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板後zui好在吸水紙(選擇幹淨、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍幹;
  2)合理安排,或多用幾台洗板機。
  五、顯色
  可能原因:
  1)顯色劑配制後放置時間過長或使用過期顯色劑;
  2)加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
  解決辦法:
  1)顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用;
  2)加樣時保持顯色劑不外流;
  3)A、B液應避免接觸金屬器械。
  六、終止
  可能原因如加終止液時産生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免産生氣泡。
  七、讀板
  如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸;盡可能實現ELISA檢測標准自動化,有效提高檢測質量。
  ELISA試劑盒在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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