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哪些原因會導致ELISA試劑盒的檢測不成功?
点击次数:17 发布时间:2019-10-15
       ELISA試劑盒即酶联免疫吸附试验,是一种常用的固相酶免疫测定方法。由于ELISA方法灵敏,特异性强不需要特殊设备,所以被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多,而且其操作中有一定的技术要求,在临床检验中除正常反应外,有时常可见到一些错误结果(即假阳性或假阴性);本司在这里为大家解读下ELISA試劑盒检测的影响因素中标本的影响。
  溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易産生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過程中往往難以完全洗脫,它可使H2O2釋放出原生態氧(O),從而催化底物四甲基聯苯胺生成可溶性的有色物質,即顯藍色,産生假陽性[2]。所以嚴重溶血標本禁用。
  標本受細菌汙染。因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌汙染的標本同溶血標本一樣,亦可産生非特異性顯色而幹擾測定結果。
  標本保存不當。在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、造成假陽性;爲克服上述幹擾,ELISA試劑盒测定的血清标本宜为新鲜采集;如不能立即测定,5 d内测定的血清标本可存放于4℃,1周后测定的血清标本应低温冻存;冻存后融解的标本,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混合后再测定,但混匀时应轻柔,不可强烈振荡。
  塑料試管能吸附抗原物質,樣本久置在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。建議使用真空采血管;並使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性。
  標本凝固不全。在工作中,有時爲了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;因此血液標本采集後必須使其充分凝固後再分離血清。
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